ICS 65.020.20 CCS B 61 DB6111 杨凌农业高新技术产业示范区地方标准 DB 6111/T 171—2021 草莓脱毒苗育苗技术规程 Technical standard for virus-free breeding of strawberry seedlings 2021 - 10 - 22 发布 杨凌示范区市场监督管理局 2021 - 11 - 01 实施 发 布 DB6111/T 171—2021 前  言 本文件依据GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。 本文件由杨凌龙德盛农业科技有限公司提出。 本文件由杨凌示范区农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：杨凌龙德盛农业科技有限公司、西北农林科技大学、蛟河市草莓研究所。 本文件主要起草人：赵 磊、李怀财、刘占杰、巨兴耀、吴云锋。 本文件由杨凌龙德盛农业科技有限公司、西北农林科技大学负责解释。 联 系 人：赵磊 联系方式：029-87036699、18792627895 联系地址：杨凌示范区邰城路3号 I DB6111/T 171—2021 草莓脱毒苗育苗技术规程 1 范围 本文件规定了草莓脱毒苗育苗技术的术语与定义、脱毒原原种苗、脱毒原种苗和脱毒商品苗的生产 技术。 本文件适用于杨凌示范区草莓脱毒苗的培育管理。生态环境、物候条件相似地区可参考执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 406-2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 3 术语和定义 下列术语与定义适用于本文件。 3.1 茎尖培养脱毒 method for virus elimination by shoot tip culture 用植株茎尖经组织培养获得脱毒植株的过程。 3.2 超低温脱毒 method for virus elimination by cryotherapy 植株茎尖经过预培养、冷冻保护剂（PVS2）处理、液氮冷冻、复苏后组织培养，获得脱毒植株的过 程。 3.3 热处理脱毒 thermotherapy-based method for virus eradication 组培苗在35 ℃～40 ℃条件下，光照继代培养1个月～2个月，取茎尖经组织培养获得脱毒植株的过 程。 3.4 脱毒原原种苗 breeder’s virus eradication stock 经脱毒处理的原始植株。 3.5 1 DB6111/T 171—2021 脱毒原种苗 original virus eradication stock 用脱毒原原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。 3.6 脱毒商品苗 virus eradication culture stock 用脱毒原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。 4 脱毒原原种苗生产 4.1 外植体建立 在封闭无害虫的设施内选择表现品种特性的健壮待脱毒植株，采集2 cm匍匐茎顶端，置于组培瓶中， 加入适量中性洗涤剂在流动的自来水下冲洗1 h～2 h。用75%乙醇表面消毒30 s，再用2%次氯酸钠溶液 消毒10 min，无菌水冲洗5遍。用滤纸吸干水分，将茎尖置于MS＋0.1 mg/L NAA＋0.5 mg/L 6-BA＋8 g/L 琼脂＋30 g/L蔗糖(pH 5.8)培养基中无菌培养1个月左右。培养条件为温度23 ℃，光照时间16 h/d，光 照强度2400 Lx。 4.2 病毒检测 培养得到的外植体，按NY/T 406-2000的规定检测病毒。 4.3 检测后处理 4.3.1 无毒外植体 直接作为脱毒苗原原种使用。 4.3.2 带毒外植体 4.3.2.1 茎尖培养 经检测只携带草莓轻型黄边病毒的外植体，在超净工作台中用无菌刀片切取0.2 mm～0.5 mm生长点 茎尖，接种到MS＋0.05 mg/L NAA＋0.3 mg/L 6-BA＋8 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖培养基中，在23 ℃，光照 时间16 h/d，光照强度2400 Lx条件下培养50 d～60 d。 注：超净工作台使用前打开紫外消毒灯消毒30 min，关闭紫外灯，打开风机用中等风量通风1 h后方可使用。无菌 刀片使用前，用75%酒精消毒，再在酒精灯上烧1 min以上，冷却后方可使用。操作人员需佩戴口罩，穿好实验 服，操作前手及手臂需经过75%酒精喷雾消毒。 4.3.2.2 超低温脱毒 经检测携带草莓斑驳病毒（strawberry mottle virus, SMoV）或同时携带草莓斑驳病毒与草莓轻 型黄边病毒（strawberry mild yellow edge virus, SMYEV）的组培苗，在超净工作台中用无菌刀片切 取1.0 mm～2.0 mm草莓生长点茎尖，接种到MS＋2 mol/L甘油＋0.3 mol/L蔗糖的预培养基上，在4 ℃黑 暗条件下培养3 d。切取1.0 mm～2.0 mm茎尖，在室温下用60%PVS2（含0.6 mol/L蔗糖的MS与100% PVS2 体积比2:3混合）加载40 min，更换100% PVS2于0 ℃条件下处理1 h。将茎尖转移至装有新鲜100% PVS2 冷冻管中，投入液氮30 min～60 min。在40 ℃水浴锅中解冻2 min，用MS＋1.2 mol/L 蔗糖培养基冲洗 2 DB6111/T 171—2021 2～3次，每次10 min。将茎尖置于MS＋0.05 mg/L NAA＋0.3 mg/L 6-BA＋8 g/L 琼脂＋30 g/L蔗糖培养 基中，在23 ℃下黑暗培养1周，转入23 ℃、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx环境下培养50 d～60 d。 4.3.2.3 热处理 经检测携带草莓镶脉病毒（strawberry vein banding virus, SVBV）或同时携带草莓镶脉病毒及 其它病毒的外植体，将组培苗置于白天36 ℃、黑夜32 ℃，光照时间16 h/d，光照强度2400 Lx的条件 下培养30 d。在超净工作台中用无菌刀片切取0.5 mm左右的草莓生产点茎尖，接种到MS＋0.05 mg/L NAA ＋0.3 mg/L 6-BA＋8 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖培养基中，在23 ℃、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx 的条件下培养50 d～60 d。 4.4 茎尖分化 按照4.4处理过的茎尖分化成带有叶原基的小芽后，转移到新的分化培养基中。长出叶片后，转移 到MS＋0.05 mg/L BA＋0.02 mg/L IBA＋0.1 mg/L GA3＋8 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖中，在23 ℃、光照时 间16 h/d、光照强度2400 Lx的条件下培养50 d～60 d。 4.5 病毒检测 茎尖分化成苗后，按NY/T 406-2000的规定检测病毒。 4.6 检测后处理 淘汰带毒植株，保留无毒植株。 4.7 无毒植株培育 4.7.1 生根 无毒植株剪去基部小芽，接种于1/2 MS＋0.1 mg/L IBA＋6 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖的生根培养基中， 在23 ℃、光照时间16 h/d、光照强度2400 Lx的条件下培养30 d～40 d后。 4.7.2 移栽 在100目防虫网温室中练苗7 d。取出组培苗，用清水冲洗干净培养基，移栽于穴盘中（培养基质配 方为草炭土：蛭石：椰糠=1:1:1）。置于有100目防虫网的温室中，在穴盘上搭建小拱棚，覆盖塑料薄 膜，控制温度15 ℃～25 ℃。移栽后7 d内湿度保持在80%以上，7 d后逐渐降低湿度。生长50 d～60 d 即获得可定植的脱毒原原种苗。 5 脱毒原种苗生产 脱毒原原种苗抽生匍匐茎后，疏理匍匐茎蔓，使其伸展分布在子苗槽内并固定，保证通风透光。匍 匐茎抽生出的苗即为脱毒原种苗。 6 脱毒商品苗生产 6.1 生产方式 脱毒原种苗在100目防虫网室中抽生匍匐茎后，疏理匍匐茎蔓，使其伸展分布在子苗槽内并固定， 保证通风透光。匍匐茎抽生出的苗即为脱毒商品苗。 3 DB6111/T 171—2021 6.2 培育管理 2 水肥要小水勤浇，脱毒原种苗定植20 d后开始冲施水溶肥，每次冲施5 kg/667m 。第一次N:P:K比 例为15:15:15；10 d后冲施第二次，N:P:K比例为15:10:10；20 d后冲施第三次，N:P:K比例为15:8:30。 2 匍匐茎大量发生时期，冲施3次含腐殖酸的水溶肥，每次5 kg/667m ，N:P:K比例为15:15:15，每次间隔 10 d。及时摘除枯黄老叶、残叶。 6.3 起苗 一般在每年的8月中旬到9月中旬，苗龄90 d～120 d时，根据生产需要起苗并及时装袋保湿。 6.4 修剪 去掉老叶、残叶，剪掉匍匐茎。 6.5 分级包装 按不同等级，每50棵一捆捆好后，用塑料袋包装，装在有通气孔的纸箱内，并用标签标明品种、规 格、数量、等级、日期，分级标准见表1。 表1 种苗分级 6.6 根径 根数 根长 cm 条 cm 五叶一心 ≥0.8 ≥8 ≥8 B级 四叶一心 ≥0.6 ≥6 ≥6 C级 三叶一心 ≥0.4 ≥4 ≥4 级别 叶片数 A级 储存与运输 在6 ℃～10 ℃下预冷10 h，在0 ℃～2 ℃预冷24 h以上。预冷后的草莓苗贮藏不超过10 d。冷藏 运输。 _________________________________ 4