中华人民共和国国家标准 GB 5413.36—2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定 National food safety standard Determination of trans fatty acids in foods for infants and young children, milk and milk products 中华人民共和国卫生部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施GB 5413.36—2010 I 前 言 本标准附录 A为资料性附录。 本标准系首次发布。GB 5413.36—2010 1 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 原理 试样中的脂肪用溶剂提取。提取物在碱性条件下与甲醇反应生成脂肪酸甲酯，用配有氢火焰离子化 检测器的气相色谱仪分离顺式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 石油醚：沸程 30 ℃～60 ℃。 4.2 乙醚（C 4H10O）。 4.3 乙醇（C 2H6O）：体积分数为 95 %。 4.4 正己烷（C 6H14）：色谱纯。 4.5 氨水（NH 3·H2O）：25 % ～28 %。 4.6 氢氧化钾（KOH ）。 4.7 甲醇（CH 4O）。 4.8 淀粉酶：活力单位：1.5 U/mg ，根据活力单位大小调整用量。 4.9 无水硫酸钠（Na 2SO 4)。 4.10 氢氧化钾- 甲醇溶液（4 mol/L ）：称取 26.4 g氢氧化钾，溶于约 80 mL甲醇中。冷却至室温，用 甲醇定容至 100 mL，加入约 5g无水硫酸钠（4.9），充分搅拌后过滤，保留滤液。 4.11 脂肪酸甲酯标准品：十八酸甲酯（C18:0 ）、反-9- 十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t ）、顺-9- 十八碳 一烯酸甲酯（C18:1-9c ）、反 -9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t， 12t）、顺 -9，12-十八碳二烯酸甲酯 （C18:2-9c ，12c），放入冰箱在-15 ℃以下保存。 GB 5413.36—2010 2 4.12 反式脂肪酸甲酯标准贮备液：浓度分别为 10.0 mg/ mL 。称取 500 mg（精确到 0.1 mg）反 -9-十八 碳一烯酸甲酯标准品和反-9 ，12-十八碳二烯酸甲酯标准品，分别用正己烷溶解并定容至 50.0 mL。放入 冰箱在-15 ℃以下保存。 4.13 反式脂肪酸甲酯标准中间液：浓度分别为 1.0 mg/ mL 。分别吸取两种反式脂肪酸甲酯标准储备液 （4.12）10.0 mL 入同一 100 mL容量瓶中并用正己烷（4.4）定容。临用前配制。亦作为标准曲线最高 浓度。 4.14 反式脂肪酸甲酯标准工作液：临用前配制。分别吸取反式脂肪酸甲酯标准中间液（4.13），0 、 2.0、 4.0、6.0、8.0、 10.0 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，此浓度即为 0、0.2、0.4、 0.6、0.8 、 1.0 mg/mL 的标准工作液。 4.15 脂肪酸甲酯标准混合液：将脂肪酸甲酯标准品（ 4.11），用正己烷配制成脂肪酸甲酯标准混合溶 液，其中每种成分的浓度约为 0.05 mg/mL 至0.5 mg/mL 。用于进行顺反脂肪酸甲酯分离程度及定性的 鉴定。 4.16 刚果红溶液：称取 1 g刚果红溶解稀释至 100 mL。 5 仪器和设备 5.1 气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器。 5.2 旋转蒸发器。 5.3 恒温水浴：40 ℃～80 ℃。 5.4 涡旋振荡器。 5.5 离心机：转速≥40 00转/分钟。 5.6 毛氏抽脂瓶。 5.7 毛氏抽脂瓶摇混器。 5.8 脂肪收集瓶：圆底烧瓶，与旋转蒸发仪配套。 5.9 天平：感量为 0.1 mg。 6 分析步骤 6.1 试样处理 6.1.1 含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约 1.5 g，液体试样约 5 g（精确到 0.1 mg）于毛氏抽 脂瓶中，加入约 0.1 g淀粉酶（酶活力 1.5 U/mg ），混合均匀后，加入 8 mL～10 mL 45 ℃±2 ℃的水， 摇匀。盖上瓶塞置于 55 ℃±2 ℃水浴（5.3）中 2 h，每隔 10min摇混一次。加入两滴约 0.1 mol/L 的碘 溶液，检验淀粉是否水解完全。若无蓝色出现，则水解完全，否则将毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至 蓝色消失，取出冷却至室温。 6.1.2 不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约 1.5 g，液体试样约 10g（精确到 0.1 mg）于毛氏 抽脂瓶（5.6 ）中，加入 10 mL 45 ℃±2 ℃的水，将试样洗入毛氏抽脂瓶（5.6 ）的小球中，充分混合， 直到试样完全散开，冷却至室温。