说明:收录25万 73个行业的国家标准 支持批量下载
文库搜索
切换导航
文件分类
频道
联系我们
问题反馈
文件分类
联系我们
问题反馈
批量下载
ICS 65.020.30 B 44 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/T 1942—2019 实验动物 中国地鼠微卫星 DNA 检测方法 Laboratory animal Method for microsatellite markers of Chinese hamster 2019 - 12 - 01 发布 山西省市场监督管理局 2020 - 02 - 01 实施 发 布 DB14/T 1942—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 3 抽样 .............................................................................. 1 4 方法 .............................................................................. 2 I DB14/T 1942—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。 本标准由山西省科学技术厅提出、归口并监督实施。 本标准起草单位:山西医科大学。 本标准主要起草人:宋国华、刘田福、陈朝阳、高继萍、张锐虎、续国强。 II DB14/T 1942—2019 实验动物 中国地鼠微卫星 DNA 检测方法 1 范围 本标准规定了实验动物 中国地鼠(以下简称实验中国地鼠)遗传检测抽样数量及微卫星 DNA 检 测方法。 本标准适用于实验中国地鼠品系鉴别、质量控制及遗传组成分析。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 实验中国地鼠 laboratory Chinese hamster 指经人工饲育,对其携带的微生物和寄生虫实行控制,遗传背景明确或者来源清楚,用于科学研究、 教学、生产和检定以及其它科学实验的中国地鼠 (Gricetulus griseus)。 2.2 近交系中国地鼠 inbred strain Chinese hamster 以全同胞或亲子交配方式繁殖 20 代以上的中国地鼠,近交系数达 98.6%以上。 2.3 封闭群中国地鼠 closed colony Chinese hamster 以非近亲交配方式繁殖中国地鼠,在不从外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖 4 代以上。 2.4 微卫星 DNA microsatellite DNA 是指基因组中由 1~6 个碱基组成的串联重复序列。不同个体的重复数不同而形成了微卫星 DNA 的多态性。 3 抽样 对近交系中国地鼠抽样数量不做要求。每个封闭群随机抽取非同窝成年实验中国地鼠,雌雄各半。 采样数量按表1进行。 1 DB14/T 1942—2019 表1 4 封闭群实验中国地鼠遗传检测抽样要求 群体数量(只) 抽样数量(只) 少于 100 ≥15 大于 100 ≥30 方法 4.1 采样 观察动物外观,核对编号,中国地鼠取 0.5 cm 尾尖组织或眼眶静脉丛采血,-20℃低温保存。 4.2 微卫星位点的选择 各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数、PCR 反应的退火温度见表 2。PCR 引物的 5’端用 FAM 荧光染料进行标记。近交系中国地鼠在表 2 中选择 10 个微卫星位点,封闭群中国地鼠在表 2 中选 择 15 个微卫星位点。 表2 位点 中国地鼠微卫星位点 引物序列 退火温度 (°C) 片段大小 最大等位基因数 51 354-391 4 58 242-299 7 58 233-292 9 51 270-355 5 58 376-432 12 58 167-214 12 59 217-357 5 F: AGGCTGCTTCCTAAACCCAT Chm35 R: CTGGGAAGGCTGAACTCAAG F: TCTGTGTGTCTGTGAATGCG Chm93 R: GGATGTAAGATGGCTCCGAA F: CATCTGGGCTTTCAATGGAT Chm147 R: GCTCCCTAAATAACCCCCAA F: AGGGGAGATCTTGGGTCAGT Chm79 R: AACATGGAGGAGCACAAACC F: GATAGGAGGGAGCAAAAGGG Chm120 R: CCTGAGAGCCTCAGAGCAGT F: TCTTCCCTTCACAACCCAAG Chm162 R: AGCAGTGCCCTTTGAAACAT Chm10 2 F: GGCTGGTGATTTCAATGGTT DB14/T 1942—2019 R:GTTCTTAATGGATCTACCCTGGGACC F: CAATGGCTGCTAAGAGAGGG Chm108 59 392-471 5 59 171-220 6 59 355-404 4 59 383-428 5 59 259-316 4 60 168-205 7 60 369-448 10 59 326-367 6 59 118-145 5 59 104-145 7 R: GTTCTTTCCCACTCACAATTTTCCTTG F: TACTCCTGTCTCCACCTCCC Chm115 R: GTTCTTTCTGGGGGATGTATGCTCTC F: CAGATGCCCAAACTCTCTCC Chm124 R:GTTCTTGTCACCCCATGGACTACACC F: TGCCCACATACATGACACAA Chm134 R: GTTCTTTCCCAACACCCTCTTCTGAC F: GACCCCATTCGTAAACCAGA Chm14 R: GTTCTTCCCCACAGTCAGCCCTATATT F: GCAGCTGGTTTTGAGCTACC Chm140 R: GTTCTTTGTTTGATCACTGGAACCCA F:AAAGGCCTTGAGGTGGAGTT Chm48 R:GTTCTTGAGGTAGGCAGGGACTGACA F:AGTTTGATGATCCCCAGCAC Chm54 R: GTTCTTCTACCCCTCTCAGCAACCTG F:GACAGATCCCGACCCATTTA Chm9 R:GTTCTTGTCCTGAGCAAGTCCAGAGC F:GCAGAAGCACAAACCAACAA Chm91 R: GTTCTTAGGCCAAGCTCTTCTCTTCC 4.3 PCR 扩增 4.3.1 提取基因组 DNA 用苯酚氯仿法或试剂盒提取基因组 DNA。 4.3.2 PCR 扩增体系 PCR 扩增总体积为 10 μL,其中 DNA( 20 ng / μL) 0.8 μL,10 × Buffer 1.0 μL,Mg2 +( 25 mmol/L) 0.8 μL,d NTP( 2.5mmol / L) 0.8 μL,上、下游引物 ( 1 pmol / L) 各 0.1 μL,Taq DNA 聚合酶( 5 U /μL) 0.1 μL,dd H2O 6.3 μL。 PCR 扩增程序:94 ℃预变性 5 min; 94 ℃变性 30 s,退火(退火温度见表 2)30 s,72 ℃延伸 45 s,35 个循环;72 ℃延伸 20 min。扩增产物 4℃保存。 3 DB14/T 1942—2019 4.3.3 PCR 产物的检测 PCR 产物,经 1.5%的琼脂糖凝胶电泳以及凝胶成像系统拍照检测扩增结果。 4.3.4 扩增产物的 STR 扫描 扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳检测确保扩增出目的片断后, 选择以 FAM 蓝色荧光标记的扩增产物, 取 1 µL 上样进行 STR 扫描。 4.4 STR 扫描结果的判读与统计分析 4.4.1 STR 扫描结果的判读 扫描结果出现两种波形:一种为纯合基因型,只有一个主波;另一种为杂合基因型,有两个主波。 同时,根据软件读出波峰处的扩增产物的碱基对数。由基因分型软件读出每个样本在每个微卫星位点的 扩增片断大小。每个位点的等位基因根据扩增片断从小到大顺序排列纪录为 a,b,c,d 等。 4.4.2 运用群体遗传分析软件对数据进行统计分析 将所有样本的每个微卫星位点的基因型以 ab,bb 等形式输入群体遗传分析软件的数据文件,计算 样品在各微卫星位点上的基因频率、平均观察等位基因数、平均有效等位基因数(Ne)、平均杂合度 (H)等。 4.5 结果判定 4.5.1 近交系中国地鼠 所有样品检测位点的等位基因都符合品系的特征,没有新的等位基因出现为合格的近交系中国地 鼠。否则判为不合格。 4.5.2 封闭群中国地鼠 群体内遗传变异采用平均杂合度指标或群体平衡状态方法进行评价。平均杂合度在 0.5~0.7 时,且 期望杂合度与观测杂合度经卡方检验无明显差异时,群体为合格的封闭群中国地鼠群体。 或者,首先得到各个位点上各基因频率、基因型频率的实际值,然后可计算出基因频率和基因型频 率的预期值。用实际值和预期值比较,通过卡方检验,可知被监测群体是否达到平衡状态。如果没有达 到平衡状态,说明群体的基因频率或基因型频率发生变化,该封闭群中国地鼠群体判为不合格。 _________________________________ 4
DB14-T 1942-2019 实验动物 中国地鼠微卫星DNA 检测方法 山西省
文档预览
中文文档
8 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助2元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共8页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助2元下载
本文档由 SC 于
2022-10-21 06:10:14
上传分享
举报
下载
原文档
(1.4 MB)
分享
友情链接
GB-T 31499-2015 信息安全技术 统一威胁管理产品技术要求和测试评价方法.pdf
GB-T 37114-2018 公共汽电车线网设置和调整规则.pdf
GB-T 2424.1-2015 环境试验 第3部分:支持文件及导则 低温和高温试验.pdf
GB-T 18916.56-2021 取水定额 第56部分:毛皮.pdf
GB-T 43692-2024 量子通信术语和定义.pdf
GB-T 4661-2015 滚动轴承 圆柱滚子.pdf
JY-T 0578-2020 超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱测试方法通则.pdf
DB11-T 2046.2-2022 智慧停车系统技术要求 第2部分:停车场(库)外场设备 北京市.pdf
GB-T 24600-2009 城镇污水处理厂污泥处置 土地改良用泥质.pdf
GB-T 43002-2023 儿童家具 质量检验及质量判定.pdf
GB-T 20001.10-2014 标准编写规则 第10部分:产品标准.pdf
GB-T 19713-2005 信息技术 安全技术 公钥基础设施 在线证书状态协议.pdf
GB-T 15851.3-2018 信息技术 安全技术 带消息恢复的数字签名方案 第3部分:基于离散对数的机制.pdf
SN-T 0001-2016 出口食品、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定.pdf
GB-T 42659-2023 表面化学分析 扫描探针显微术 采用扫描探针显微镜测定几何量:测量系统校准.pdf
民航 MH-T 6016-2017 航空食品车.pdf
GB-T 28827.3-2012 信息技术服务 运行维护 第3部分:应急响应规范.pdf
NB-T 11027—2022 煤矿防突预测图绘制规范.pdf
ISO IEC 27005-2022 信息安全、 网络安全和隐私保护-信息安全风险管理指南.pdf
NY-T 2259-2012 橡胶树主要病虫害防治技术规范.pdf
交流群
-->
1
/
3
8
评价文档
赞助2元 点击下载(1.4 MB)
回到顶部
×
微信扫码支付
2
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。